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蛋白质纯化应注意的事项

2021-06-04 14:27:28

蛋白质纯化过程中,必须时刻注意几个问题。

首先,提纯过程中始终要控制PH值,尽量避免由于过酸或过碱而引起蛋白质的不可逆变化。

缓冲液要有合适的PH值,又要对蛋白质无害。

在提纯植物和菌类的蛋白质时,通常需要较大的缓冲容量,这时就要注意缓冲液的浓度,同时还要注意缓冲液的组分是否合适,会不会产生副反应等。

含硫基的蛋白质特别容易被氧化,因此,要维持一个还原环境。可加入一些含有硫基的还原剂,并使整个体系保持无氧状态,以解决此问题。

但在有些情况下,加入的硫基化合物可能会抑制蛋白质的活力。

提纯过程中,通常要保持低温,因为细胞内有蛋白水解酶存在,这种酶在组织匀化后处于活化状态,能降解蛋白质。

因此必须保持低温来降低水解酶的作用。

但要注意,有时低温又能使某些酶的四级结构遭到破坏,一般情况下,蛋白质在0°时比较稳定,但丙酮酸羧  化酶对冷敏感,25°时稳定。有些酶则需在-20°或-70°下稳定活性。

蛋白质纯化过程中一个最大的问题是在整个纯化过程中,蛋白质或多或少地总是要受到与生理状态极不相同的溶液环境的有害影响,这一点对其功能在活细胞内受高度控制的蛋白质来说是非常值得注意的。

相反,有些蛋白质却能适应较大的环境变化,而不改变其结构和功能。

此外,还要一些常用的方法可有效地减少蛋白质变性。

要注意的另一个因素是:在提纯过程中即使很小心,蛋白质也会发生结构上的变化,因此,提纯后的蛋白质,即使其活力基本上得以保留,它的构象也可能不同于天然构象或完整功能的构象,在这种情况下,在生物体外测得的蛋白质的性质未必能准确地反映这些大分子在活体内的性状。

以上就离子交换树脂厂家-蓝晓科技给大家分享的关于蛋白质纯化过程中,必须时刻注意几个问题。更多精彩内容,可以继续关注我公司官方平台!

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